Denaturierung: Die DNA wird auf ca. 90°C erhitzt, womit sich die Wasserstoffbrückenbindungen
zwischen dem komplementären Basen auflösen. Damit wird die DNA in ihre Einzelstränge aufgetrennt. Hybridisierung: Bei ca. 60°C lagern (Annealing) sich die spezifischen Primer an die 3' Enden
der DNA Einzelstränge an. Es gilt das Prinzip der Komplementarität: Die Primer können sich gemäß
ihrer Basen nur an ein komplementäres Gegenstück (Adenin mit Thymin und Cytosin mit Guanin) anlagern. Arbeitsblätter zur Unterrichtseinheit PCR — Landesbildungsserver Baden-Württemberg. Polymerisation: Die Temperatur wird auf ungefähr 70°C erhöht. DNA-Polymerasen beginnen an den
Primern von 3' nach 5' mit der Anlagerung von komplementären Basen (Elongation). Am Ende sind
aus zwei DNA-Einzelsträngen, zwei DNA-Doppelstränge entstanden. Nun findet wie eben schon erwähnt
eine Wiederholung dieser drei Schritte vor.
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Die PCR wird heute üblicherweise apparativ in einem Thermocycler durchgeführt. Sie läuft in mehreren Schritten ab:
2. 1 Denaturierung
Durch Erwärmung des Versuchs- Assays auf bis zu 96° C wird die DNA denaturiert, indem die Wasserstoffbrücken zwischen den beiden Ketten der zu vervielfältigenden DNA gespalten werden. Die Nukleinsäure liegt danach einzelsträngig vor. 2. 2 Primer-Bindung
Beim Annealing bzw. der Primerhybridisierung wird der Versuchsansatz auf ungefähr 55 bis 65°C abgekühlt und die Primer binden jeweils an das 3'-Ende der Gensequenz. Die konkrete Temperatur hängt dabei von der Nukleinsäuresequenz und -länge der verwendeten Primer ab. Polymerase kettenreaktion arbeitsblatt 5. 2. 3 Polymerase-Bindung und DNA-Synthese
Während der Elongation synthetisiert die Polymerase bei einer Temperatur von ca. 72°C vom Primer aus in 5'-3'-Richtung den komplementären Strang. Beim ersten Durchgang entstehen Ketten variabler Länge, da die Polymerase nach der Replikation einer zufälligen Anzahl von Basenpaaren die Synthese abbricht. 2.
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Die Taq-Polymerasen synthetisieren wieder die Tochterstränge, dann folgt wieder der Schritt 1 (Aufspalten der Doppelstränge), der Schritt 2 (Anlagerung der Primer) und der Schritt 3 (DNA-Synthese), und so geht das immer weiter. Die Anzahl der DNA-Polymerase-Moleküle und die Zahl der eingesetzten DNA-Primer wächst natürlich mit jedem Zyklus. Am Anfang mussten nur 2 Primer für jede Ur-DNA eingesetzt werden. Nach dem 1. Gentechnik II - Identifizierungsmethoden Ablauf der Polymerase-Kettenreaktion (PCR). Zyklus sind bereits 4 Primer notwendig, nach dem 2. Zyklus 8 Primer-Moleküle und so weiter. Das Gleiche gilt für die Moleküle der DNA-Polymerase. Aber da die PCR in vitro ("im Glas") durchgeführt wird, ist die Zugabe dieser wichtigen Moleküle kein Problem. ➥ PCR-Graphik mit drei Zyklen
Sie können hier eine Graphik herunterladen, die drei komplette PCR-Zyklen zeigt. Für diese Webseite ist die Graphik zu groß (vor allem zu lang), daher habe ich sie in eine eigene Datei ausgelagert. Thermocycler
Ein ganzer Zyklus dauert nur wenige Minuten, weil man heute programmierbare Geräte einsetzt, so genannte Thermocycler, die die PCR quasi von selbst durchführen.
Auch in der Grundlagenforschung spielt die Polymerase-Kettenreaktion eine dominierende Rolle, sei es bei der Sequenzanalyse, der gezielten oder zufälligen Mutagenese oder sei es bei der zellunabhängigen Klonierung. Sehr bekannt wurde die PCR durch die Analyse menschlicher DNA. Durch gezieltes Vermehren von DNA-Abschnitten, die von Mensch zu Mensch verschieden lang sein können, erhält man bei der anschließenden Gelelektrophorese bestimmte Muster, vergleichbar mit einem Strichcode. Polymerase kettenreaktion arbeitsblatt in e. In der Kriminalbiologie können so Täter, die Zellmaterial am Tatort hinterlassen haben (Hautabschürfungen, Haarwurzeln, Blut... ) identifiziert werden. Das DNA-Bandenmuster aus PCR und Restriktionsschnitten ist für jede Person so spezifisch wie ihr Fingerabdruck. In Analogie dazu nennt man dieses Verfahren "genetic fingerprinting". Nach dem gleichen Prinzip werden Verwandtschaftsbeziehungen geklärt. Werden Bestandteile der Nahrung oder Kleidung auf die biologische Herkunft hin untersucht, bedient man sich ebenfalls der PCR.
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